使用方法
1. 工作液配制：
1）JC-1粉末（5 mg）：直接加1 mL DMSO到粉末內，室溫顛倒混勻使其充分溶解，即得到5 mg/mL的儲存液。溶液分裝成小量儲存于-20℃，避光干燥，避免反復凍融。
2）JC-1儲存液（1 mg in DMSO）：本品是JC-1的DMSO儲存液，濃度為5 mg/mL。使用者需要根據單次用量來分裝，-20℃避光干燥，避免反復凍融。
3）工作液配制：將凍存的儲存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預熱的培養基直接稀釋儲存液（5 mg/mL）到需要的工作液濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心JC-1工作液1 min，小心吸取上清轉移到新的管子內。整個過程要避光操作。注意：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過程中形成聚集顆粒，則建議細胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒后再使用。
2. JC-1染色步驟（流式細胞儀）
1）于6-，12或24-孔板上進行細胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養箱培養過夜。選擇合適的化合物根據特定的步驟進行凋亡誘導。 注：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據自己的細胞類型培養至合適的密度。
2）取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內；
3）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4）用0.5 mL JC-1工作液重懸細胞，于37℃，5%CO2培養箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
5）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
6）用2 mL細胞培養液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
7）重復步驟6）；
8）用0.5 mL新鮮培養液或者緩沖液重懸細胞，即可進行后續的流式分析。注意：請馬上進行流式定量分析，此細節很重要。
數據分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通道檢測。
3. JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）
A． 懸浮細胞
1）-6）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；
7）用0.3 mL的緩沖液重懸細胞，即可進行熒光顯微鏡檢測。注意：請馬上進行熒光顯微分析，此細節重要。
數據分析：使用可同時檢測熒光素fluorescein/羅丹明或者熒光素fluorescein/Texas Red?的雙帶帶通濾波器進行檢測。未凋亡的活細胞因JC-1聚集后線粒體呈紅色，最大發射波長為590 nm。凋亡和壞死細胞染料一直以單體形式存在，線粒體呈現綠色。最大發射波長為530 nm。
B． 貼壁細胞
1）培養皿內用蓋玻片進行細胞爬片或者細胞培養在腔室玻片（chamber slide）上。選擇合適的化合物根據特定的步驟進行凋亡誘導。
2）染色前開始配制JC-1工作液，配制步驟見上。
3） 吸掉細胞培養液，然后加入足夠覆蓋所有細胞的JC-1工作液。于37℃，5%CO2培養箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
4）吸掉培養液，然后用合適的緩沖液來清洗細胞2次。
5）加入2 mL細胞培養液（培養液可含有血清和酚紅）或者PBS緩沖液，于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察。數據分析同A. 懸浮細胞。
4. JC-1染色步驟（熒光酶標儀）
1）-7）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；
9）用300 μL緩沖液重懸細胞；然后按照每孔100 μL的量將染色好的細胞轉移到黑色的96孔板內，即可進行熒光酶標板分析。注意：請馬上進行熒光顯微分析，此細節重要。
數據分析：健康細胞內，JC-1單體聚集形成聚合物，線粒體呈現強烈的紅色熒光（激發波長550 nm, 發射波長600 nm）。凋亡或壞死細胞內JC-1以單體形式存在，線粒體呈強烈的綠色熒光（激發波長485 nm, 發射波長535 nm）。然后計算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值，用來判斷細胞健康程度。
注意事項
1）JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強光接觸。
2）JC-1染色完成后，立即進行后續的結果分析非常必要；
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
